植物内源基因trnaleu核酸检测试剂盒实验要点:
1.ctab 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2.在最适条件下,dna—ctab 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的dna 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使dna 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到dna. —ctab 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能抑制rna 酶的活性,而且酚可以溶解含poly(a)的mrna。如果用苯酚和氯仿的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(苯酚—氯仿—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pbs 的dh5α菌种接种在lb 固体培养基(含50μg/ml amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml lb 液体培养基(含50μg/ml amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒dna 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得dna 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
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