NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)试剂盒 说明 技术文章

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nad-苹果酸脱氢酶(nad-mdh)试剂盒商品货号:qs1002
英文名称:nad-malate dehydrogenase(nad-mdh)assay kit
别名:nad-苹果酸脱氢酶试剂盒 nad-mdh kit nad-苹果酸脱氢酶(nad-mdh)试剂盒 nad-苹果酸脱氢酶(nad-mdh)测试盒
检测方法:常量法
商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
qs1002-50 管/48 样 50 管/48 样 ¥280.00元
产品详细介绍
测定意义:
mdh (ec 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中mdh是tca循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中mdh催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,mdh在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,mdh分为nad-依赖的mdh和nadp-依赖的mdh,细菌中通常只含有nad-mdh,在真核细胞中,nad-mdh分布于细胞质和线粒体中。
测定原理:
nad-mdh催化nadh还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。
产品说明书
货号:qs1002 规格:50 管/48 样
nad-苹果酸脱氢酶(nad-mdh)试剂盒说明书 紫外分光光度法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
mdh (ec 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中 mdh 是 tca 循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中 mdh 催化草酰乙酸形成苹果酸。 草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,mdh 在细胞多种生理活动中 扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病 性等。根据不同的辅酶特异性,mdh 分为 nad-依赖的 mdh 和 nadp-依赖的 mdh,细菌中通常只 含有 nad-mdh,在真核细胞中,nad-mdh 分布于细胞质和线粒体中。
测定原理:
nad-mdh 催化 nadh 还原草酰乙酸生成苹果酸,导致 340nm 处光吸收下降。
自备实验用品及仪器:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 ml 石英比色皿和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一: 提取液 60 ml×1 瓶,在 4℃保存;
试剂二: 液体 50 ml×1 瓶,在 4℃保存;
试剂三: 粉剂×2 支,-20℃保存;临用前加入 300μ l 蒸馏水,充分溶解待用;用不完的 试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四: 粉剂×2 支,-20℃保存;临用前加入 300μ l 蒸馏水,充分溶解待用;用不完的 试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
样本测定的准备:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一体积(ml)为 1000~5000:1 的比例(建议 2000 万细菌或细胞加入 1ml 试剂一), 超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200w,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃ 离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):试剂一体积(ml)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织, 加入 1ml 试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、将试剂二在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上。
3、操作表:
试剂名称(μ l) 测定孔
样本 20
试剂二 760
试剂三 10
试剂四 10
将上述试剂按顺序加入 1 ml 石英比色皿中,混匀后立即在 340 nm 波长下记录初始吸光度 a1 和反应 1min 后的吸光度 a2,计算 δa=a1-a2。
注意:若 a1-a2 大于 0.5,需将样本用提取液稀释,使 a1-a2 小于 0.5,可提高检测灵敏度。 计算公式中乘以相应稀释倍数。
nad-mdh 活力单位的计算:
1、血清(浆)nad-mdh 活力的计算
单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗 1 nmol 的 nadh 定义为一个酶活力单位。
nad-mdh(nmol/min/ml)=[δ a×v 反总÷(ε ×d)×109 ]÷v 样÷t=6430×δ a
2、组织、细菌或细胞中 nad-mdh 活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 nadh 定义为一个酶活力单位。
nad-mdh ( nmol/min/mg prot ) =[δ a×v 反 总 ÷ ( ε ×d ) ×109 ]÷(v 样 ×cpr) ÷t=6430×δa÷cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 的 nadh 定义为一个酶活力单位。
nad-mdh(nmol/min/g 鲜重)=[δ a×v 反总÷(ε ×d)×109 ]÷(w× v 样÷v 样总)÷t =6430×δ a÷w
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 nadh 定义为一个酶活力单位。 nad-mdh(nmol/min/104 cell)=[δ a×v 反总÷(ε ×d)×109 ]÷(2000×v 样÷v 样总) ÷t=3.215×δa
v 反总:反应体系总体积,8×10-4 l;ε :nadh 摩尔消光系数,6.22×103 l / mol /cm;d: 比色皿光径,1cm;v 样:加入样本体积,0.02ml;v 样总:加入提取液体积,1 ml;t:反应 时间,1 min;w:样本质量,g;cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;2000:细胞或细菌总数,2000 万。
系列产品及单价
辅酶ⅰ系列        
qs1000 辅酶ⅰnad(h)含量测试盒 可见分光光度法 50管/24样 500
ms1000 辅酶ⅰnad(h)含量测试盒 微量法 100管/48样 920
qs1001 乳酸脱氢酶(ldh)测试盒 可见分光光度法 50管/24样 170
ms1001 乳酸脱氢酶(ldh)测试盒 微量法 100管/48样 330
qs1002 nad-苹果酸脱氢酶(nad-mdh)测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 280
ms1002 nad-苹果酸脱氢酶(nad-mdh)测试盒 微量法 100管/96样 550
qs1003 nadp-苹果酸脱氢酶(nadp-mdh)测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 320
ms1003 nadp-苹果酸脱氢酶(nadp-mdh)测试盒 微量法 100管/96样 600
qs1004 nadh氧化酶(nox)测试盒 可见分光光度法 50管/48样 450
ms1004 nadh氧化酶(nox)测试盒 微量法 100管/96样 850
qs1005-50 柠檬酸合酶(cs)测试盒 可见分光光度法 50管/48样 3200
qs1005-25 柠檬酸合酶(cs)测试盒 可见分光光度法 25管/24样 2000
ms1005 柠檬酸合酶(cs)测试盒 微量法 100管/48样 3500
qs1006 丙酮酸脱羧酶(pdc)测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 720
ms1006 丙酮酸脱羧酶(pdc)测试盒 微量法 100管/96样 1400
qs1007 醇脱氢酶(adh)测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 280
ms1007 醇脱氢酶(adh)测试盒 微量法 100管/96样 550
qs1008 单脱氢抗坏血酸还原酶(mdhar)测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 800
ms1008 单脱氢抗坏血酸还原酶(mdhar)测试盒 微量法 100管/96样 1550
qs1009 乙醛脱氢酶(aldh)测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 420
ms1009 乙醛脱氢酶(aldh)测试盒 微量法 100管/96样 800
qs1010 nad激酶(nadk)测试盒 可见分光光度法 50管/48样 600
ms1010 nad激酶(nadk)测试盒 微量法 100管/48样 1100
qs1011 线粒体呼吸链复合体ⅰ/nadh-辅酶q还原酶测试盒 紫外分光光度法 25管/24样 1280
ms1011 线粒体呼吸链复合体ⅰ/nadh-辅酶q还原酶测试盒 微量法 100管/96样 2500

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