T4 DNA聚合酶 (Exo-)说明书
产品详情
t4 dna聚合酶是来源于t4噬菌体的dna聚合酶，又名t4 gp43，分子量为104kda，在t4噬菌体dna复制中负责先导链和滞后链5’→3’方向的脱氧核糖核酸合成。t4 dna polymerase的聚合酶活性强于dna 聚合酶 i，不具有 5'-3' 核酸外切酶活性。本t4 dna polymerase(exo-)为通过点突变d219a改造，使其3'-5' 外切核酸酶活性大大降低，但保留了完整的聚合酶活性。
本公司t4 dna polymerase 是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
特点
ø 无链置换活性
ø 无5’-3’外切酶活性，不能进行切口平移
ø 3’-5’外切酶活性大大地降低
ø 热失活：75°c for 20 min
浓度
5u/μl
活性定义
一个活力单位即在37℃条件下，30分钟内催化10 nmol dntp的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。
活性测定条件
1×t4 dna polymerase (exo-)buffer：20 mm tris-hcl，50 mm nacl，10 mm mgcl2，0.5mm dtt，0.1mg/ml bsa (ph 7.9 @ 25°c)，37℃温育
酶贮存缓冲液
20 mm tris-hcl，200 mm nacl，10 mm mgcl2，5mm dtt，50% glycerol，ph 7.5。
产品包装规格及组成
component
78dc10062-200u
78dc10062-1000u
t4 dna polymerase(exo-)
200u
1000u
10×t4 dna polymerase (exo-)buffer
0.5ml
1.5ml
0.1% bsa（1mg/ml）
0.5ml
1.5ml
适用范围
ø 缝隙填充(无缺口平移活性)
ø 去除3’突出单链或补平5’突出单链，形成平末端
ø 生成无缝克隆中的5’突出端，实现基因和载体的互补配对
应用举例
1.补平5’突出单链，形成平末端
1）按下表配制反应体系
反应组分
ul
10× buffer
2
2mm dntp
2
底物：3’突出或5’突出dna
100ng-1µg
t4 dna polymerase (5u/µl)
1
0.1%bsa
2
h2o
总体积
20
2) 37℃×30min反应，
3）75℃×15min失活酶，
按需进行后续实验。
质量控制
经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
运输与保存
-20℃可保存2年，避免反复冻融。
注意事项
l 适用于凹陷单链区聚合补平反应（聚合酶反应）的缓冲液包括：am buffer a-d、a1-d1、t4 dna连接酶反应缓冲液。
l 鉴于am buffer b2是此酶最youbuffer，当使用不包含bsa的缓冲液时，建议补充bsa。
l activity in am buffers：am buffer a: 60% ；am buffer b、c、d: 100%。
l 离子强度超过100 mm时活性将被抑制，sh基的还原剂促进活性。
l 活性易受模板dna高级结构影响，t4 gene 32（t4 ssb）蛋白可以显著提高聚合酶活性。
货号 品名 规格 品牌
78dc10062-200u t4 dna聚合酶 (exo-) 200u biohub
78dc10062-1000u t4 dna聚合酶 (exo-) 1000u biohub
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本公司t4 dna polymerase 是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
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ø 3’-5’外切酶活性大大地降低
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活性测定条件
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component
78dc10062-200u
78dc10062-1000u
t4 dna polymerase(exo-)
200u
1000u
10×t4 dna polymerase (exo-)buffer
0.5ml
1.5ml
0.1% bsa（1mg/ml）
0.5ml
1.5ml
适用范围
ø 缝隙填充(无缺口平移活性)
ø 去除3’突出单链或补平5’突出单链，形成平末端
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应用举例
1.补平5’突出单链，形成平末端
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反应组分
ul
10× buffer
2
2mm dntp
2
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100ng-1µg
t4 dna polymerase (5u/µl)
1
0.1%bsa
2
h2o
总体积
20
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l 离子强度超过100 mm时活性将被抑制，sh基的还原剂促进活性。
l 活性易受模板dna高级结构影响，t4 gene 32（t4 ssb）蛋白可以显著提高聚合酶活性。
货号 品名 规格 品牌
78dc10062-200u t4 dna聚合酶 (exo-) 200u biohub
78dc10062-1000u t4 dna聚合酶 (exo-) 1000u biohub
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