粒体柠檬酸（ MCA）含量试剂盒 说明 技术文章
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线粒体柠檬酸（mitochondrion citric acid, mca）含量 试剂盒商品货号：qs2107
英文名称：mitochondrial citric acid(mca) content assay kit
别名：线粒体柠檬酸含量测定试剂盒 mca kit 线粒体柠檬酸(mca）含量测定试剂盒 线粒体柠檬酸(mca）含量测试盒
检测方法：常量法
商品货号：商品品牌：规格基本售价选择规格
qs2107-25管/24样 25管/24样 ￥2000.00元
qs2107-50管/48样 50管/48样 ￥2500.00元
产品详细介绍
测定意义：
ca是线粒体三羧酸循环的个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰coa与草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。
配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰coa含量、柠檬酸合酶活性和ca含量，其中（1）丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度，（2）综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰coa含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰coa情况，（3）乙酰coa含量、柠檬酸合酶活性和ca含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。
测定原理：
ca在柠檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性条件下，α-酮酸进一步与苯肼反应，生成相应的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰，该波长下吸光度的变化程度可反映出ca的含量。
产品说明书
货号：qs2107-25 规格：25 管/24 样
线粒体柠檬酸（mitochondrion citric acid, mca）含量试剂盒说明书
分光光度法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
ca 是线粒体三羧酸循环的个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰 coa 与草酰乙酸合成， 其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。 配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰 coa 含量、柠檬酸合酶活性和 ca 含量， 其中（1）丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度，（2）综合分析丙酮 酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰 coa 含量变化可以反映脂肪酸β -氧化途径提供的乙酰 coa 情况，（3）乙酰 coa 含量、柠檬酸合酶活性和 ca 含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。
测定原理：
ca 在柠檬酸裂解酶的作用下，生成α -酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性条件下，α -酮酸进一 步与苯肼反应，生成相应的α -酮酸苯腙；α -酮酸苯腙在 330nm 处有吸收峰，该波长下吸光度 的变化程度可反映出 ca 的含量。
自备实验用品及仪器：
分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1ml 石英比色皿、研钵和蒸馏水。
试剂组成和配制：
酸性提取液：液体 25ml×1 瓶，4℃保存。
碱性提取液：液体 25ml×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 7.5ml×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 2.5ml×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 7.5ml 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃ 保存；
标准品：液体 1ml×1 支，10μ mol/ml 柠檬酸标准液，4℃保存。
线粒体中柠檬酸提取：
称 0.05~0.1g 样品（建议称 0.1g 样本），加入 0.5ml 酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃离心 5min；取上清至另一 ep 管中，11000g/min 4℃离心 10min，弃上清（取 300μ l 该上 清液和 300μ l 碱性提取液中和后可用于细胞质 ca 含量测定）；沉淀即线粒体，向沉淀中加入 0.5ml 酸性提取液，充分悬浮溶解，超声波破碎（功率 20％，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），取此溶液 300μ l 和 300μ l 碱性提取液中和，混匀，置冰上待测（不可用于蛋白质含量 测定）。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 330nm，蒸馏水调零。
2、试剂一、二和三 37℃预热 10min。
3、样本测定：
空白管和标准管通常只需要各做一个。
试剂名称(μ l) 空白管 标准管 测定管
试剂一 300 300 300
蒸馏水 300
标准液 300
样本 300
试剂二 100 100 100
试剂三 300 300 300
充分混匀，330nm 立即测定初始吸光值 a1 和 37℃孵育 30min 后的吸光值 a2，δ a=a2 –a1。
柠檬酸含量计算：
（1）按蛋白浓度计算
柠檬酸含量(μ mol/mg prot)=[c 标准管×(δ a 测定管－δ a 空白管)÷(δ a 标准管－δ a 空白 管) ×v 样]÷（v 样÷cpr）=10×(δ a 测定管－δ a 空白管)÷(δ a 标准管－δ a 空白管)÷cpr 蛋白质含量需要另外测定。
（2）按样本鲜重计算
柠檬酸含量(μ mol/g 鲜重)=[c 标准管×(δ a 测定管－δ a 空白管)÷(δ a 标准管－δ a 空白 管) ×v 样]÷（w×v 样÷v 样总）=10×(δ a 测定管－δ a 空白管)÷(δ a 标准管－δ a 空白 管)÷w
c 标准管：标准液浓度，10μ mol/ml； v 样：加入反应体系中样本体积：0.3ml；v 样总：加 入提取液体积：1ml；cpr：样品蛋白浓度，mg/ml；w：样本质量，g。
注意事项：
低检测限为10nmol/mg prot或1μ mol/g鲜重。
三羧酸循环系列 单价
qs2100 α酮戊二酸脱氢酶（α-kgdh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 720
ms2100 α酮戊二酸脱氢酶（α-kgdh）测试盒 微量法 100管/96样 1400
qs2101 柠檬酸（ca）含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样 350
ms2101 柠檬酸（ca）含量测试盒 微量法 100管/96样 690
qs2102 琥珀酸脱氢酶（sdh)测试盒 可见分光光度法 50管/48样 260
ms2102 琥珀酸脱氢酶（sdh)测试盒 微量法 100管/96样 500
qs2103 丙酮酸脱氢酶（pdh)测试盒 可见分光光度法 50管/48样 720
ms2103 丙酮酸脱氢酶（pdh)测试盒 微量法 100管/96样 1400
qs2104 线粒体异柠檬酸脱氢酶（icdhm)测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 530
ms2104 线粒体异柠檬酸脱氢酶（icdhm)测试盒 微量法 100管/96样 1000
qs2106-50 乙酰*测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 3200
qs2106-25 乙酰*测试盒 紫外分光光度法 25管/24样 2000
ms2106 乙酰*测试盒 微量法 100管/96样 5800
qs2107-50 线粒体柠檬酸(mca）含量测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 2500
qs2107-25 线粒体柠檬酸(mca）含量测试盒 紫外分光光度法 25管/24样 1500
ms2107 线粒体柠檬酸(mca）含量测试盒 微量法 100管/96样 4700
qs2206 乳酸含量（la）测试盒 可见分光光度法 50管/24样 650
ms2206 乳酸含量（la）测试盒 微量法 100管/48样 1280
qs2204 丙酮酸（pa)含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样 300
ms2204 丙酮酸（pa)含量测试盒 微量法 100管/96样 580
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线粒体柠檬酸（mitochondrion citric acid, mca）含量 试剂盒商品货号：qs2107
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检测方法：常量法
商品货号：商品品牌：规格基本售价选择规格
qs2107-25管/24样 25管/24样 ￥2000.00元
qs2107-50管/48样 50管/48样 ￥2500.00元
产品详细介绍
测定意义：
ca是线粒体三羧酸循环的个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰coa与草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。
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产品说明书
货号：qs2107-25 规格：25 管/24 样
线粒体柠檬酸（mitochondrion citric acid, mca）含量试剂盒说明书
分光光度法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
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ca 是线粒体三羧酸循环的个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰 coa 与草酰乙酸合成， 其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。 配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰 coa 含量、柠檬酸合酶活性和 ca 含量， 其中（1）丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度，（2）综合分析丙酮 酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰 coa 含量变化可以反映脂肪酸β -氧化途径提供的乙酰 coa 情况，（3）乙酰 coa 含量、柠檬酸合酶活性和 ca 含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。
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ca 在柠檬酸裂解酶的作用下，生成α -酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性条件下，α -酮酸进一 步与苯肼反应，生成相应的α -酮酸苯腙；α -酮酸苯腙在 330nm 处有吸收峰，该波长下吸光度 的变化程度可反映出 ca 的含量。
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试剂组成和配制：
酸性提取液：液体 25ml×1 瓶，4℃保存。
碱性提取液：液体 25ml×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 7.5ml×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 2.5ml×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 7.5ml 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃ 保存；
标准品：液体 1ml×1 支，10μ mol/ml 柠檬酸标准液，4℃保存。
线粒体中柠檬酸提取：
称 0.05~0.1g 样品（建议称 0.1g 样本），加入 0.5ml 酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃离心 5min；取上清至另一 ep 管中，11000g/min 4℃离心 10min，弃上清（取 300μ l 该上 清液和 300μ l 碱性提取液中和后可用于细胞质 ca 含量测定）；沉淀即线粒体，向沉淀中加入 0.5ml 酸性提取液，充分悬浮溶解，超声波破碎（功率 20％，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），取此溶液 300μ l 和 300μ l 碱性提取液中和，混匀，置冰上待测（不可用于蛋白质含量 测定）。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 330nm，蒸馏水调零。
2、试剂一、二和三 37℃预热 10min。
3、样本测定：
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试剂名称(μ l) 空白管 标准管 测定管
试剂一 300 300 300
蒸馏水 300
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样本 300
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c 标准管：标准液浓度，10μ mol/ml； v 样：加入反应体系中样本体积：0.3ml；v 样总：加 入提取液体积：1ml；cpr：样品蛋白浓度，mg/ml；w：样本质量，g。
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ms2204 丙酮酸（pa)含量测试盒 微量法 100管/96样 580
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