宫颈癌体外模型中CCL22极化TAMs 到 M2a巨噬细胞
宫颈癌是全球女性癌症死亡的第四大原因，也是第三大常见癌症。目前，免疫疗法是宫颈癌治疗的突破性进展。然而，总缓解率较低。因此，进一步确定新的免疫检查点的努力至关重要。
根据活化状态和发挥功能的不同，巨噬细胞主要可分为m1型即经典活化的巨噬细胞和m2型即替代性活化的巨噬细胞。最近，研究描述了m2巨噬细胞的三种不同亚型（m2a，m2b和m2c）。m2a巨噬细胞被il-4极化，在组织重塑和减轻炎症中起作用。m2亚型在肿瘤中起作用，m2a协同促进迁移性和侵袭性乳腺癌细胞反应。肿瘤相关巨噬细胞（tams），包括m1和m2型巨噬细胞，靶向tams，能够有效抑制肿瘤的生长和转移，因此，tams 是具有潜力的抗肿瘤靶标。tams可以通过直接参与t细胞抑制和凋亡受体来抑制t细胞功能。然而，一些研究表明，tams的fc γ受体参与抗体依赖性细胞毒性。因此，tams的清除会阻断效应t细胞的反应，导致药物作用降低。将促肿瘤的tams调控为抗肿瘤类型是研究的重要焦点。
c-c基序趋化因子配体22（ccl22）作为一种分泌蛋白，参与各种免疫细胞的趋化活性，包括单核细胞和活化的t淋巴细胞。ccl22已被证明在肿瘤促进中起作用。m2巨噬细胞中表达的大量ccl22使结直肠癌对化疗具有耐药性。此外，ccl22的mrna在宫颈癌组织中的表达高于正常宫颈组织中的mrna。已经证明，ccl22与宫颈癌预后相关。然而，ccl22促进宫颈癌进展的机制尚不清楚。
在德国慕尼黑大学附属医院妇产科、心脏病科、病理科以及奥格斯堡大学附属医院妇产科的一项联合研究中，构建了体外共培养体系以形成tams，通过流式细胞术评估了ccl22对m2a标志物cd206表达的影响，并揭示了ccl22可能是宫颈癌的治疗靶点，这可能是由于其在调节巨噬细胞极化中的作用。
ccl22在宫颈癌体外tams中的表达
为了确定体外宫颈癌中ccl22 mrna水平，实验量化了其在tams，m1，m2a，m2b和m2c巨噬细胞中的表达。为了获得tams，将宫颈癌细胞与m0巨噬细胞共培养48小时。结果表明，与hela或siha细胞（人宫颈癌细胞）共培养的tams中ccl22的mrna水平显著高于m1巨噬细胞。应该注意的是，虽然无显著性差异，但ccl22的mrna水平在tams中表现出高于m2b和m2c巨噬细胞的趋势，而在m2a巨噬细胞中较低。此外，单独培养或与m0巨噬细胞共培养的宫颈癌细胞系中ccl22的mrna水平极低（图1）。这些结果表明，ccl22主要来源于宫颈癌微环境中的tams，而非宫颈癌细胞。
图1 ccl22在宫颈癌体外tams中的表达。由极化的巨噬细胞（m1、m2a、m2b、m2c）、tams（肿瘤相关巨噬细胞，由与hela或siha细胞共培养形成）、宫颈癌细胞hela、siha、co-hela 和co-siha（单独和在共培养系统中）制备总rna。使用ccl22特异性引物构建rt-pcr分析。
cd206++ 和 cd163++ 分别是 m2a 和 m2c 巨噬细胞的标志物
不同亚群的巨噬细胞中的表面分子不同，包括cd80，cd86，cd206，light（tnfsf14），tlr4和cd163。通过流式细胞术测试细胞表面分子的表达。将fmo样品和未极化巨噬细胞m0分子的平均荧光强度（mfi）分别视为 marker+ 和marker++ 的临界值。m1和m2b巨噬细胞的cd80++百分比明显高于其他组（图2 a、b）。m2a巨噬细胞的cd206++百分比明显高于所有其他巨噬细胞亚型（图2 c、d）。light未显示显著变化（图2 e、f）。与所有其他巨噬细胞亚型相比，m2c巨噬细胞的cd163++ 含量显著更高（图2 g、h）。综上所述，cd80++无法区分m1和m2b巨噬细胞，其中m2a巨噬细胞的标志物是cd206++，m2c巨噬细胞标志物是cd163++。
图2 cd206++和cd163++分别是m2a和m2c巨噬细胞的标志物。
ccl22 可通过自分泌通路将宫颈癌中 tams 极化为的 m2a 巨噬细胞
如前所述，ccl22+ 细胞浸润量较高可预测宫颈癌预后不良。正常宫颈组织局部免疫微环境中ccl22 mrna水平低于宫颈癌组织。ccl22是m2a巨噬细胞的标志物。因此，有必要研究ccl22是否可能通过诱导m2a巨噬细胞的生成来促进肿瘤进展。为了验证这一点，实验通过转染人ccl22特异性sirna（si-ccl22）或阴性对照sirna（sicon-ccl22）在m0细胞中进行rna干扰。随后，分别将处理后的m0细胞与hela和siha细胞共培养。实时pcr分析证实了rna干扰的效率（图3 a）。si-ccl22 tams中 ccl22 mrna的表达量为sicon-ccl22的17%。
从共培养的细胞中分离出共培养的sicon-ccl22 tams和共培养的si-ccl22 tams。接下来，通过流式细胞术检测了siccl22-tams与sicon-tams 的cd206的表达。如图3 b-e，敲低ccl22表达显著降低了与hela细胞和siha细胞共培养的tams的cd206的mfi。这些数据表明，敲低ccl22可以阻止m2a巨噬细胞的极化。
ccl22载体的效率通过实时荧光定量pcr分析（图3 f）。从共培养的细胞中分离出t-ccl22 tams中ccl22 mrna的表达。接下来，通过流式细胞术检测了t-ccl22-tams与con-tams 的cd206的表达。如图3 g-j ，过表达的ccl22分别大大提高了与hela和siha细胞共培养的tams中的cd206的mfi。这些数据表明，过表达的ccl22阻止了m2a巨噬细胞的极化。
图3 ccl22可以通过自分泌通路使宫颈癌中的tams极化为m2a巨噬细胞。
这项研究表明，ccl22是从tams而不是宫颈癌细胞系分泌的。而且，在宫颈癌中，当巨噬细胞在含有人血清的培养基中培养时，cd206++ 是m2a巨噬细胞的标志物，cd163++是m2c巨噬细胞的标志物，cd80++ 是m1和m2b巨噬细胞的标志物。ccl22可以使宫颈癌中tams向m2a巨噬细胞极化。因此，ccl22可能是其治疗的治疗靶点。
参考文献：wang q, sudan k, schmoeckel e, kost bp, kuhn c, vattai a, vilsmaier t, mahner s, jeschke u, heidegger hh. ccl22-polarized tams to m2a macrophages in cervical cancer in vitro model. cells. 2022 jun 25;11(13):2027. doi: 10.3390/cells11132027. pmid: 35805111; pmcid: pmc9265611.
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c-c基序趋化因子配体22（ccl22）作为一种分泌蛋白，参与各种免疫细胞的趋化活性，包括单核细胞和活化的t淋巴细胞。ccl22已被证明在肿瘤促进中起作用。m2巨噬细胞中表达的大量ccl22使结直肠癌对化疗具有耐药性。此外，ccl22的mrna在宫颈癌组织中的表达高于正常宫颈组织中的mrna。已经证明，ccl22与宫颈癌预后相关。然而，ccl22促进宫颈癌进展的机制尚不清楚。
在德国慕尼黑大学附属医院妇产科、心脏病科、病理科以及奥格斯堡大学附属医院妇产科的一项联合研究中，构建了体外共培养体系以形成tams，通过流式细胞术评估了ccl22对m2a标志物cd206表达的影响，并揭示了ccl22可能是宫颈癌的治疗靶点，这可能是由于其在调节巨噬细胞极化中的作用。
ccl22在宫颈癌体外tams中的表达
为了确定体外宫颈癌中ccl22 mrna水平，实验量化了其在tams，m1，m2a，m2b和m2c巨噬细胞中的表达。为了获得tams，将宫颈癌细胞与m0巨噬细胞共培养48小时。结果表明，与hela或siha细胞（人宫颈癌细胞）共培养的tams中ccl22的mrna水平显著高于m1巨噬细胞。应该注意的是，虽然无显著性差异，但ccl22的mrna水平在tams中表现出高于m2b和m2c巨噬细胞的趋势，而在m2a巨噬细胞中较低。此外，单独培养或与m0巨噬细胞共培养的宫颈癌细胞系中ccl22的mrna水平极低（图1）。这些结果表明，ccl22主要来源于宫颈癌微环境中的tams，而非宫颈癌细胞。
图1 ccl22在宫颈癌体外tams中的表达。由极化的巨噬细胞（m1、m2a、m2b、m2c）、tams（肿瘤相关巨噬细胞，由与hela或siha细胞共培养形成）、宫颈癌细胞hela、siha、co-hela 和co-siha（单独和在共培养系统中）制备总rna。使用ccl22特异性引物构建rt-pcr分析。
cd206++ 和 cd163++ 分别是 m2a 和 m2c 巨噬细胞的标志物
不同亚群的巨噬细胞中的表面分子不同，包括cd80，cd86，cd206，light（tnfsf14），tlr4和cd163。通过流式细胞术测试细胞表面分子的表达。将fmo样品和未极化巨噬细胞m0分子的平均荧光强度（mfi）分别视为 marker+ 和marker++ 的临界值。m1和m2b巨噬细胞的cd80++百分比明显高于其他组（图2 a、b）。m2a巨噬细胞的cd206++百分比明显高于所有其他巨噬细胞亚型（图2 c、d）。light未显示显著变化（图2 e、f）。与所有其他巨噬细胞亚型相比，m2c巨噬细胞的cd163++ 含量显著更高（图2 g、h）。综上所述，cd80++无法区分m1和m2b巨噬细胞，其中m2a巨噬细胞的标志物是cd206++，m2c巨噬细胞标志物是cd163++。
图2 cd206++和cd163++分别是m2a和m2c巨噬细胞的标志物。
ccl22 可通过自分泌通路将宫颈癌中 tams 极化为的 m2a 巨噬细胞
如前所述，ccl22+ 细胞浸润量较高可预测宫颈癌预后不良。正常宫颈组织局部免疫微环境中ccl22 mrna水平低于宫颈癌组织。ccl22是m2a巨噬细胞的标志物。因此，有必要研究ccl22是否可能通过诱导m2a巨噬细胞的生成来促进肿瘤进展。为了验证这一点，实验通过转染人ccl22特异性sirna（si-ccl22）或阴性对照sirna（sicon-ccl22）在m0细胞中进行rna干扰。随后，分别将处理后的m0细胞与hela和siha细胞共培养。实时pcr分析证实了rna干扰的效率（图3 a）。si-ccl22 tams中 ccl22 mrna的表达量为sicon-ccl22的17%。
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图3 ccl22可以通过自分泌通路使宫颈癌中的tams极化为m2a巨噬细胞。
这项研究表明，ccl22是从tams而不是宫颈癌细胞系分泌的。而且，在宫颈癌中，当巨噬细胞在含有人血清的培养基中培养时，cd206++ 是m2a巨噬细胞的标志物，cd163++是m2c巨噬细胞的标志物，cd80++ 是m1和m2b巨噬细胞的标志物。ccl22可以使宫颈癌中tams向m2a巨噬细胞极化。因此，ccl22可能是其治疗的治疗靶点。
参考文献：wang q, sudan k, schmoeckel e, kost bp, kuhn c, vattai a, vilsmaier t, mahner s, jeschke u, heidegger hh. ccl22-polarized tams to m2a macrophages in cervical cancer in vitro model. cells. 2022 jun 25;11(13):2027. doi: 10.3390/cells11132027. pmid: 35805111; pmcid: pmc9265611.
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