对于特定抗体,我应该使用哪种抗原修复方法
一些公司测试其抗体的免疫组织化学应用,并将在数据表中包含建议的抗原修复方法(注意:一些建议的方法不是最佳的)。如果以上都没有给您明确的答案,则需要进行测试。
如何使用各种抗原修复方法对新抗体进行测试
最初,您可能想要测试 hier 中的两种方法,例如柠檬酸盐缓冲液 (ph 6)和tris-edta (ph 9),以及 pier 中的一种或两种方法,例如蛋白酶 k和/或胰蛋白酶。这应该会给您一个很好的机会获得特定抗体的最佳抗体。
我用各种抗原修复方法测试了我的抗体,但仍然没有结果
该抗体可能不适合福尔马林固定、石蜡包埋的组织(某些抗体仅适用于冰冻切片),或者该抗体有问题(过期或损坏),您可能需要改用其他抗体。
在热诱导表位修复 (hier) 方法中,哪一种比较好
柠檬酸盐缓冲液(ph 6)法是常用的方法之一。一些研究表明tris-edta (ph 9)或tris-hcl (ph 10)更佳。测试可能是了解哪种抗体适合特定抗体的最佳方法。
使用hier进行预处理时需要考虑哪些关键因素
(1) 修复液温度应在95℃左右。
(2)孵育时间至少10分钟,一般20分钟左右。
(3) 修复液的ph值取决于您所使用的溶液。
在蛋白水解酶诱导表位修复 (pier) 方法中,哪一种比较好
蛋白酶 k似乎是常用的一种。浓度、孵育时间和温度可能是需要考虑的更重要的因素。同样,测试是了解哪种抗体适合特定抗体的最佳方法。
使用pier进行预处理时需要考虑哪些关键因素
(1) 酶的浓度通常为 0.05-0.1%,具体取决于组织和固定的类型。
(2)孵育时间可为5-30分钟,常用10-15分钟。
(3)孵化温度通常为37℃。
冰冻切片是否需要进行抗原修复:新鲜冰冻切片的免疫染色不需要进行抗原修复。因为抗原修复是破坏福尔马林固定形成的交联,将新鲜冰冻切片切片并用冰冷的丙酮固定5-10分钟。
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