脂肪测定仪--粮油检验 植物油脂中缩水甘油脂肪酸酯的测定3
3.3气相色谱-质谱法
3.3.1样品提取
称取100-110mg植物油于带有螺旋盖的玻璃管中，加入50μl内标工作液和2ml无水四qing呋喃，涡旋15s使之混匀。加入30μl*的酸性水溶液，涡旋后在50oc摇床震荡反应15min。加入3ml 0.6%的*溶液以终止反应。为了将油脂从水相中分离出来，往样品中加入2ml正庚烷，旋涡15s。两相分离后，将上层液相转移至干净的玻璃管中，氮吹至干（35-40oc下，15-20min），并用1ml无水四qing呋喃复溶。
然后，加入1.8ml硫酸/甲醇溶液，涡旋10s，然后将其置于40oc摇床震荡反应16h。反应结束后，向样品溶液中加入0.5ml饱和*溶液，涡旋10s，以终止反应。氮吹至约1ml，以去除有机溶剂，待净化。
待净化液中依次加入2ml硫酸钠溶液和2ml正庚烷，涡旋10s充分混合。静置，待两相自然分层后弃去上层液相（含有脂肪酸甲酯的正庚烷），并用正庚烷重复提取1次，残留液待衍生化反应。
向残留液中加入250μl饱和苯基硼酸溶液，涡旋10s，室温下超声处理5min。加入1ml正庚烷，涡旋10s，转移上层液相至空瓶；用1ml正庚烷再提取一次，混合两次提取液。氮吹至全干。加入1ml正庚烷复溶，涡旋10s至充分溶解，滤膜过滤后转移至进样瓶待测。
3.3.2样品测定
气相色谱条件
色谱柱：聚二甲基硅氧烷毛细管色谱柱(30m×0.25mm×1.0μm )或相当型号色谱柱。进样量：1.0μl。进样方式：脉冲不分流进样。进样口温度：250oc。载气：高纯氦气（纯度≥99.999%）。流速：0.8ml/min。升温程序：80oc保持1min；以10oc/min 的速率升温至170oc，再以3oc/min 的速率升温至200oc；然后以15oc/min 的速率升温至300oc，保持15min。
质谱条件
传输线温度：300oc。离子源温度：230oc。四极杆温度：150oc。离子源：电子轰击模式（ei）。选择离子监测模式（sim）参数：（1）3-mbpd的苯基硼酸衍生物（m/z）147（定量离子）；240（定性离子）；（2）3-mbpd-d5的苯基硼酸衍生物（m/z）150（定量离子）；245（定性离子）。溶剂延迟时间：5min。
3.3.3方法学验证
3.3.3.1标准曲线及相关系数
配制缩水甘油棕榈酸酯（gly-p）与内标氘代缩水甘油棕榈酸酯（gly-p-d5）不同浓度比例的标准溶液（如表4所示），以gly-p（以gly计）与内标gly-p-d5（以gly-d5计）的质量比为横坐标、以3-mbpd定量离子（m/z 147）与3-mbpd-d5定量离子（m/z 150）的峰面积之比为纵坐标，做标准曲线得到标准曲线方程y=0.7355x+0.0369，计算得相关系数r2=0.9971。
表4 gly-p与内标gly-p-d5浓度的比例
gly-p
gly-p-d5
浓度（μg/ml）
添加量（μl）
浓度（μg/ml）
添加量（μl）
10
25
50
50
10
50
50
50
10
100
50
50
100
20
50
50
100
40
50
50
100
80
50
50
3.3.3.2方法回收率及精密度实验
以不含缩水甘油脂肪酸酯的植物油（特级初榨橄榄油）为空白样品基质，分别添加低、中、高3个浓度水平的gly-p标准品，每个水平重复3次实验，按照前述方法处理和分析样品，计算回收率（如表5所示），平均回收率在83.45%～94.12%，rsd为3.67%~9.04%，回收率和精密度都能满足分析要求。
表5 加标回收率和精密度实验结果（n=3）
加标量（mg/kg）
测得平均值（mg/kg）
平均回收率（%）
rsd（%）
0.5
0.47
94.12
9.04
2
1.77
88.72
6.22
6
5.01
83.45
3.67
（三）采用标准和*标准的情况，以及与、国外同类标准水平的对比，或者与测试的国外样品、样机的有关数据对比情况
本标准等同采用了美国油脂化学家学会（aocs）的*标准joint aocs/jocs official method cd 28-10《glycidyl fatty acid esters in edible oils》和aocs official method 29a-13《2- and 3-mcpd fatty acid esters and glycidol fatty acid esters in edible oils and fats by acid transesterification》中食用油脂的缩水甘油脂肪酸酯测定方法的内容。本标准发布实施后，将达到*水平。
（四）与有关的现行法律、法规和强制性标准、行业标准的关系
本标准颁布实施后，*我国植物油脂中缩水甘油脂肪酸酯测定方法的空白，更有利于行业应用；与现行的法律、法规及其他标准没有矛盾。
（五）重大分歧意见的处理经过和依据
无。
（六）按照标准化法的有关规定，提出强制性标准或*性标准的建议
建议将本标准作为粮食行业*标准使用。
（七）废止现行有关标准的建议
无。
（八）其他应予说明的事项
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3.3.1样品提取
称取100-110mg植物油于带有螺旋盖的玻璃管中，加入50μl内标工作液和2ml无水四qing呋喃，涡旋15s使之混匀。加入30μl*的酸性水溶液，涡旋后在50oc摇床震荡反应15min。加入3ml 0.6%的*溶液以终止反应。为了将油脂从水相中分离出来，往样品中加入2ml正庚烷，旋涡15s。两相分离后，将上层液相转移至干净的玻璃管中，氮吹至干（35-40oc下，15-20min），并用1ml无水四qing呋喃复溶。
然后，加入1.8ml硫酸/甲醇溶液，涡旋10s，然后将其置于40oc摇床震荡反应16h。反应结束后，向样品溶液中加入0.5ml饱和*溶液，涡旋10s，以终止反应。氮吹至约1ml，以去除有机溶剂，待净化。
待净化液中依次加入2ml硫酸钠溶液和2ml正庚烷，涡旋10s充分混合。静置，待两相自然分层后弃去上层液相（含有脂肪酸甲酯的正庚烷），并用正庚烷重复提取1次，残留液待衍生化反应。
向残留液中加入250μl饱和苯基硼酸溶液，涡旋10s，室温下超声处理5min。加入1ml正庚烷，涡旋10s，转移上层液相至空瓶；用1ml正庚烷再提取一次，混合两次提取液。氮吹至全干。加入1ml正庚烷复溶，涡旋10s至充分溶解，滤膜过滤后转移至进样瓶待测。
3.3.2样品测定
气相色谱条件
色谱柱：聚二甲基硅氧烷毛细管色谱柱(30m×0.25mm×1.0μm )或相当型号色谱柱。进样量：1.0μl。进样方式：脉冲不分流进样。进样口温度：250oc。载气：高纯氦气（纯度≥99.999%）。流速：0.8ml/min。升温程序：80oc保持1min；以10oc/min 的速率升温至170oc，再以3oc/min 的速率升温至200oc；然后以15oc/min 的速率升温至300oc，保持15min。
质谱条件
传输线温度：300oc。离子源温度：230oc。四极杆温度：150oc。离子源：电子轰击模式（ei）。选择离子监测模式（sim）参数：（1）3-mbpd的苯基硼酸衍生物（m/z）147（定量离子）；240（定性离子）；（2）3-mbpd-d5的苯基硼酸衍生物（m/z）150（定量离子）；245（定性离子）。溶剂延迟时间：5min。
3.3.3方法学验证
3.3.3.1标准曲线及相关系数
配制缩水甘油棕榈酸酯（gly-p）与内标氘代缩水甘油棕榈酸酯（gly-p-d5）不同浓度比例的标准溶液（如表4所示），以gly-p（以gly计）与内标gly-p-d5（以gly-d5计）的质量比为横坐标、以3-mbpd定量离子（m/z 147）与3-mbpd-d5定量离子（m/z 150）的峰面积之比为纵坐标，做标准曲线得到标准曲线方程y=0.7355x+0.0369，计算得相关系数r2=0.9971。
表4 gly-p与内标gly-p-d5浓度的比例
gly-p
gly-p-d5
浓度（μg/ml）
添加量（μl）
浓度（μg/ml）
添加量（μl）
10
25
50
50
10
50
50
50
10
100
50
50
100
20
50
50
100
40
50
50
100
80
50
50
3.3.3.2方法回收率及精密度实验
以不含缩水甘油脂肪酸酯的植物油（特级初榨橄榄油）为空白样品基质，分别添加低、中、高3个浓度水平的gly-p标准品，每个水平重复3次实验，按照前述方法处理和分析样品，计算回收率（如表5所示），平均回收率在83.45%～94.12%，rsd为3.67%~9.04%，回收率和精密度都能满足分析要求。
表5 加标回收率和精密度实验结果（n=3）
加标量（mg/kg）
测得平均值（mg/kg）
平均回收率（%）
rsd（%）
0.5
0.47
94.12
9.04
2
1.77
88.72
6.22
6
5.01
83.45
3.67
（三）采用标准和*标准的情况，以及与、国外同类标准水平的对比，或者与测试的国外样品、样机的有关数据对比情况
本标准等同采用了美国油脂化学家学会（aocs）的*标准joint aocs/jocs official method cd 28-10《glycidyl fatty acid esters in edible oils》和aocs official method 29a-13《2- and 3-mcpd fatty acid esters and glycidol fatty acid esters in edible oils and fats by acid transesterification》中食用油脂的缩水甘油脂肪酸酯测定方法的内容。本标准发布实施后，将达到*水平。
（四）与有关的现行法律、法规和强制性标准、行业标准的关系
本标准颁布实施后，*我国植物油脂中缩水甘油脂肪酸酯测定方法的空白，更有利于行业应用；与现行的法律、法规及其他标准没有矛盾。
（五）重大分歧意见的处理经过和依据
无。
（六）按照标准化法的有关规定，提出强制性标准或*性标准的建议
建议将本标准作为粮食行业*标准使用。
（七）废止现行有关标准的建议
无。
（八）其他应予说明的事项
详谈JW19--3S便携式水质分析仪
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国内优势200N指针式推拉力计特点
闪蒸干燥机安全操作规程
臭氧检测仪适用于现场快速检测
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高斯计的应用与各类探头的时候介绍
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一般选择高低温湿热测试箱应该从哪方面入手?
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