糖化血清蛋白含量检测试剂盒（NBT法）（微量法）
糖化血清蛋白含量检测试剂盒（nbt法）（微量法）
产品货号：ba1893
产品规格：100t/96s
产品简介：
血清葡萄糖与白蛋白及其它血清蛋白分子n末端的氨基发生非酶促糖化反应，形成高分子酮胺结构，在碱性条件下与硝基四氯唑蓝反应，生成紫红色化合物甲臜。在530nm波长处比色，测定其od值，与dmf标准比较，即可求得其含量。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成：
试剂名称
规格
保存条件
试剂一
液体5ml×1瓶
2-8℃
试剂二
液体2ml×1瓶
-20℃
试剂三
液体30ml×1瓶
2-8℃
试剂四
液体2ml×1瓶
2-8℃
标准品
粉剂×1支
-20℃
溶液的配制：
标准品：临用前加入0.8ml试剂二，充分溶解，配制成10mmol/l dmf标准液，2-8℃保存4周；再取20µl 10 mmol/l dmf标准液和30µl试剂二混合配制成成4mmol/l标准溶液待测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、恒温培养箱、低温离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
血清（浆）：收集血清（浆）到离心管内，按照血清（浆）体积（ml）∶试剂一体积（ml）= 10∶1的比例（建议吸取0.2ml血清（浆）于ep管中，加入0.02ml试剂一），充分混匀，于37℃保温30min。
二、测定步骤
1.可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至530nm，蒸馏水调零。
2.标准溶液：按照标准溶液体积（ml）：试剂一体积（ml）= 10∶1的比例（建议吸取0.2ml 4mmol/l标准溶液于ep管中，加入0.02ml试剂一），充分混匀，于37℃保温30min。
3.按下表步骤加样：
试剂名称（μl）
测定管
空白管
标准管
标准空白管
样本
10
-
-
-
蒸馏水
-
10
-
-
标准溶液
-
-
10
-
试剂二
-
-
-
10
试剂三
200
200
200
200
37℃显色15min
试剂四
10
10
10
10
充分混匀，取200μl于微量玻璃比色皿或96孔板中，于530nm处测定吸光度。分别记为a测定、a空白、a标准、a标准空白。δa测定=a测定-a空白，δa标准=a标准-a标准空白。
注：空白管和标准空白管均只需做1-2次。
三、糖化血清蛋白含量计算
糖化血清蛋白含量（mmol/l）=c×δa测定÷δa标准×f= 4×δa测定÷δa标准×f
c：标准溶液浓度，4mmol/l；f：稀释倍数。
注意事项：
1.显色完成后，应立即加入试剂四；建议一次性不要做太多样本，防止试剂四加入不及时导致测定结果受到影响。
2.如果测定吸光值a＞1.5或δa＞1，建议稀释样本后再测定，计算公式中乘以稀释倍数；如果测定吸光值较低或接近空白od值，建议增加操作表中的样本量后再进行测定（空白管、标准管、标准空白管需要增加至相同体积量）。
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注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成：
试剂名称
规格
保存条件
试剂一
液体5ml×1瓶
2-8℃
试剂二
液体2ml×1瓶
-20℃
试剂三
液体30ml×1瓶
2-8℃
试剂四
液体2ml×1瓶
2-8℃
标准品
粉剂×1支
-20℃
溶液的配制：
标准品：临用前加入0.8ml试剂二，充分溶解，配制成10mmol/l dmf标准液，2-8℃保存4周；再取20µl 10 mmol/l dmf标准液和30µl试剂二混合配制成成4mmol/l标准溶液待测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、恒温培养箱、低温离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
血清（浆）：收集血清（浆）到离心管内，按照血清（浆）体积（ml）∶试剂一体积（ml）= 10∶1的比例（建议吸取0.2ml血清（浆）于ep管中，加入0.02ml试剂一），充分混匀，于37℃保温30min。
二、测定步骤
1.可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至530nm，蒸馏水调零。
2.标准溶液：按照标准溶液体积（ml）：试剂一体积（ml）= 10∶1的比例（建议吸取0.2ml 4mmol/l标准溶液于ep管中，加入0.02ml试剂一），充分混匀，于37℃保温30min。
3.按下表步骤加样：
试剂名称（μl）
测定管
空白管
标准管
标准空白管
样本
10
-
-
-
蒸馏水
-
10
-
-
标准溶液
-
-
10
-
试剂二
-
-
-
10
试剂三
200
200
200
200
37℃显色15min
试剂四
10
10
10
10
充分混匀，取200μl于微量玻璃比色皿或96孔板中，于530nm处测定吸光度。分别记为a测定、a空白、a标准、a标准空白。δa测定=a测定-a空白，δa标准=a标准-a标准空白。
注：空白管和标准空白管均只需做1-2次。
三、糖化血清蛋白含量计算
糖化血清蛋白含量（mmol/l）=c×δa测定÷δa标准×f= 4×δa测定÷δa标准×f
c：标准溶液浓度，4mmol/l；f：稀释倍数。
注意事项：
1.显色完成后，应立即加入试剂四；建议一次性不要做太多样本，防止试剂四加入不及时导致测定结果受到影响。
2.如果测定吸光值a＞1.5或δa＞1，建议稀释样本后再测定，计算公式中乘以稀释倍数；如果测定吸光值较低或接近空白od值，建议增加操作表中的样本量后再进行测定（空白管、标准管、标准空白管需要增加至相同体积量）。
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