值得收藏！！！核酸提取技术科普！！！
核酸提取是指从样本中提取出dna或rna的过程，是进行pcr检测等分子生物学实验的前提步骤之一，在生命科学领域中有着广泛的实践意义。比如，在疾病诊断中，通过提取患者样本中的核酸，可以进行病原体检测，如新冠·病毒、流感病毒等的检测，从而进行疾病的早期诊断和治疗；在基因测序中，通过提取样本中的dna或rna，可以进行全基因组测序、转录组测序等实验，从而研究基因的结构和功能，探究生命活动的本质。在生物多样性研究中，通过提取环境样本中的dna，可以进行环境dna分析等实验，从而研究环境中存在的各种生物的种类和数量，了解生物多样性的分布和变化规律。
核酸提取的历史与发展
核酸的发现可以追溯到1869年，瑞士生物化学家friedrich miescher从鲑鱼精子中提取出一种未知物质，后来被称为“核酸”。随着科学技术的发展，20世纪40年代至50年代，科学家们对核酸结构进行了深入研究，揭示出脱氧核糖核酸（dna）的双螺旋结构及其在生物体内的遗传功能。而核酸提取技术的历史可以追溯到20世纪早期，随着时间的推移，科学家们通过不断改进和尝试，开发了更多可以提高核酸提取效率和准确性的技术。在20世纪60年代，人们开始使用硅胶柱层析法来提取dna和rna。这种方法利用硅胶柱对核酸进行分离和纯化，是一种非常常用的方法。此外，还有一些其他的方法，如盐析法、酚/氯仿法和商业化试剂盒等。随着分子生物学的发展，核酸提取技术也得到了进一步的改进。现在，我们可以使用自动化的核酸提取仪来大规模地提取dna和rna，并且可以使用pcr等技术来扩增和分析这些核酸。
核酸提取纯化的要求
高纯度：核酸提取后的样品应该尽可能纯净，避免杂质的干扰。高纯度的核酸样品可以提高下游实验的准确性和可靠性。
高浓度：提取的核酸样品应该具有足够的浓度，以满足下游实验的需求。对于一些敏感的实验，如pcr和测序等，需要较高浓度的核酸样品才能获得可靠的结果。
完整性：提取的核酸样品应该具有足够的完整性，避免在提取过程中发生降解和断裂。完整的核酸样品可以提高下游实验的成功率和可靠性。
无污染：在核酸提取过程中，应该避免污染和交叉污染。特别是对于rna的提取，应该避免rnase的污染，这可能会导致rna的降解和破坏。
传统核酸提取实验原理
核酸提取实验涉及到两个基本原理：细胞裂解和核酸沉淀。细胞裂解是将dna从细胞壁和细胞膜中释放出来的过程，在此过程中，各种物理和化学手段如冰冻-破碎、酶解和离子交换等可以使细胞破裂，释放出核酸；而核酸沉淀则是将dna从其他杂质中分离出来的过程。这里的关键技巧是利用离心机和酒精洗涤。离心机的高速旋转让细胞碎片沉积在管底，而酒精则帮助dna在管壁上形成白色絮状物，方便我们提取。
核酸提取类型
1.基因组dna提取
2.总rna提取
3.mirna提取
4.质粒抽提
5.cfdna提取
6.cfrna提取
传统核酸提取步骤
样品的采集：根据实验的需要，采集适当的样品，如细胞、组织、血液、尿液等。
细胞裂解：将样品进行细胞裂解，以释放核酸。不同的样品需要不同的破碎方法，如超声波、机械切割、化学裂解等。
核酸的沉淀：通过加入盐、酒精等试剂，使核酸从上清液中沉淀下来。不同的试剂可以选择不同的沉淀方法，如盐沉淀、乙醇沉淀等。
核酸的洗涤：将沉淀的核酸进行洗涤，以去除杂质和残留试剂。洗涤方法可以选择酒精洗涤、盐水洗涤等。
核酸的溶解：将洗涤后的核酸样品进行溶解，以获得高浓度的核酸溶液。不同的核酸需要不同的溶解方法，如用te缓冲液溶解dna，用rnase-free水溶解rna等。
核酸的质量检测：使用核酸电泳、比色法、分光光度法等方法对核酸样品进行质量检测，以确定核酸的纯度、完整性和浓度。
不同类型的rna和dna可能需要不同的提取方案和试剂盒，因此在进行核酸提取时需要根据实验设计和研究目的选择适当的方法和试剂盒。
核酸提取方法
从核酸提取技术的发展历程来看，核酸提取主要经历了四个发展阶段，涉及的提取技术分别为：有机溶剂法、硅胶膜离心柱提取法、磁珠法和自动化工作系统提取法。提取的模式也从单一样本类型逐步发展至多样本统一核酸提取类型，逐步实现高效、便捷、准确地完成整个核酸提取过程。
其中，硅胶膜离心柱提取法、磁珠法是当今市场上主流的提取方法。
硅胶膜离心柱提取法的原理是：对核酸有较强的亲和力和吸附力的硅载体特异地吸附核酸，没有被吸附的蛋白质、多糖、脂类等其他生化成份在离心时被甩出柱子，剩下吸附在特异载体上的核酸，用洗脱液洗脱、分离，便得到纯化的核酸。这种方法成本较低，但提取质量较好，比传统的酚氯法提取的纯度高，有利于rna保护，而且能进行微量操作。
磁珠法的原理是：利用磁性珠子与核酸的亲和力，将核酸特异性地结合到磁珠表面，然后通过磁场的作用将核酸-磁珠复合物分离出来，最后用水或缓冲液将核酸洗脱下来。近年来，磁珠材料的改进和多种化学修饰的引入，使得磁珠法核酸提取试剂盒具有更高的灵敏度、选择性和稳定性。另外，磁珠法可以与自动化设备配合使用，目前市场上已经有多种自动化核酸提取仪器和系统，可以实现高通量、高效率的核酸提取和纯化。
下游应用：
磁珠法核酸提取试剂盒和硅胶膜离心柱提取试剂盒的下游应用可以包括：
pcr扩增：从提取的dna或rna中扩增感兴趣的片段，用于分析基因型、表达水平、突变等信息。
实时荧光定量pcr：用于定量检测dna或rna的含量，可以用于细胞数量、病毒载量、基因表达等的定量分析。
基因测序：从提取的dna或rna中进行测序，用于分析基因序列、寻找突变等。
蛋白质研究：从提取的dna或rna中合成蛋白质，用于研究蛋白质结构、功能等。
分子标记标记物检测：用于检测特定基因或序列，例如用于病原体检测、遗传疾病检测等。
这些下游应用可以帮助我们更深入地研究生物样本中的dna或rna，并揭示它们在生物学、医学等领域中的重要作用。
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高浓度：提取的核酸样品应该具有足够的浓度，以满足下游实验的需求。对于一些敏感的实验，如pcr和测序等，需要较高浓度的核酸样品才能获得可靠的结果。
完整性：提取的核酸样品应该具有足够的完整性，避免在提取过程中发生降解和断裂。完整的核酸样品可以提高下游实验的成功率和可靠性。
无污染：在核酸提取过程中，应该避免污染和交叉污染。特别是对于rna的提取，应该避免rnase的污染，这可能会导致rna的降解和破坏。
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