人抗胃壁细胞抗体（APCA）ELISA检测试剂盒使用说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断
人（human）抗胃壁细胞抗体（apca）
elisa检测试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（elisa）。往预先包被胃壁细胞抗原的包被微孔中，依次加入标本、hrp标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物tmb显色，tmb在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（od 值），与cutoff值相比较，从而判定标本中抗胃壁细胞抗体（apca）的存在与否。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：edta、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul
3.37℃恒温箱
操作注意事项
1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.预处理后的样本无需稀释，直接取50μl加样即可。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
名称
96孔配置
48孔配置
备注
微孔酶标板
12孔×8条
12孔×4条
无
阴性对照
0.5ml
0.5ml
无
阳性对照
0.5ml
0.5ml
无
检测抗原-hrp
10ml
5ml
无
20×洗涤缓冲液
25ml
15ml
按说明书进行稀释
底物a
6ml
3ml
无
底物b
6ml
3ml
无
终止液
6ml
3ml
无
封板膜
2张
2张
无
说明书
1份
1份
无
自封袋
1个
1个
无
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液350μl，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μl；
3.待测样本孔加待测样本50μl；
4.随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（hrp）标记的检测抗原100μl，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物a、b各50μl，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μl，15min内，在450nm波长处测定各孔的od值。
结果判断
1. 试验有效性：阳性对照孔od值平均值≥1.00；
阴性对照孔od值平均值≤0.15。
2. 临界值（cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
3. 阴性判断：样品od值＜临界值（cut off），样品为阴性
4. 阳性判断：样品od值＞临界值（cut off），样品为阳性
试剂盒性能
1.准确性：阳性对照孔od值平均值≥1.00；阴性对照孔od值平均值≤0.15，说明试验结果有效。
2.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
3.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
4.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
5.有效期：6个月
从2011年开始我们致力于在生命科学领域、生物医学实验技术及论文润色服务，协助客户各类实验服务及论文润色十多年，是您值得信赖的科研合作伙伴!
如果您受时间、试验条件等限制而无法完成您的课题研究，欢迎您与我们联系。
实验技术服务：
试剂盒免费代检测
石蜡冰冻切片tunel凋亡荧光
扫描电镜服务
实验室代做实验项目
透射电镜服务实验服务
石蜡/冰冻切片tunel凋亡
核仁组成区嗜银-agnor染色实验服务
细胞荧光染料标记检测实验
rna结合蛋白免疫沉淀（rip）实验代做
he染色
六胺银法染色实验服务
天狼猩红染色实验服务
网状纤维染色银染实验服务
染色质免疫沉淀分析(clip)实验服务
免疫组化ihc染色实验服务
油红o染色实验服务
atp/adp检测实验服务
蛋白双向(2-d)电泳实验服务
免疫共沉淀（co-ip）实验代做
免疫细胞化学icc实验服务
pkc活性检测实验
免疫共沉淀（chirp）实验
蛋白双向2d-wb电泳实验服务
端粒酶活性检测实验
探针合成实验服务
nf-kb p65活性检测实验
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elisa检测试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（elisa）。往预先包被胃壁细胞抗原的包被微孔中，依次加入标本、hrp标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物tmb显色，tmb在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（od 值），与cutoff值相比较，从而判定标本中抗胃壁细胞抗体（apca）的存在与否。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：edta、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul
3.37℃恒温箱
操作注意事项
1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.预处理后的样本无需稀释，直接取50μl加样即可。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
名称
96孔配置
48孔配置
备注
微孔酶标板
12孔×8条
12孔×4条
无
阴性对照
0.5ml
0.5ml
无
阳性对照
0.5ml
0.5ml
无
检测抗原-hrp
10ml
5ml
无
20×洗涤缓冲液
25ml
15ml
按说明书进行稀释
底物a
6ml
3ml
无
底物b
6ml
3ml
无
终止液
6ml
3ml
无
封板膜
2张
2张
无
说明书
1份
1份
无
自封袋
1个
1个
无
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液350μl，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μl；
3.待测样本孔加待测样本50μl；
4.随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（hrp）标记的检测抗原100μl，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物a、b各50μl，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μl，15min内，在450nm波长处测定各孔的od值。
结果判断
1. 试验有效性：阳性对照孔od值平均值≥1.00；
阴性对照孔od值平均值≤0.15。
2. 临界值（cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
3. 阴性判断：样品od值＜临界值（cut off），样品为阴性
4. 阳性判断：样品od值＞临界值（cut off），样品为阳性
试剂盒性能
1.准确性：阳性对照孔od值平均值≥1.00；阴性对照孔od值平均值≤0.15，说明试验结果有效。
2.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
3.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
4.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
5.有效期：6个月
从2011年开始我们致力于在生命科学领域、生物医学实验技术及论文润色服务，协助客户各类实验服务及论文润色十多年，是您值得信赖的科研合作伙伴!
如果您受时间、试验条件等限制而无法完成您的课题研究，欢迎您与我们联系。
实验技术服务：
试剂盒免费代检测
石蜡冰冻切片tunel凋亡荧光
扫描电镜服务
实验室代做实验项目
透射电镜服务实验服务
石蜡/冰冻切片tunel凋亡
核仁组成区嗜银-agnor染色实验服务
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rna结合蛋白免疫沉淀（rip）实验代做
he染色
六胺银法染色实验服务
天狼猩红染色实验服务
网状纤维染色银染实验服务
染色质免疫沉淀分析(clip)实验服务
免疫组化ihc染色实验服务
油红o染色实验服务
atp/adp检测实验服务
蛋白双向(2-d)电泳实验服务
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免疫细胞化学icc实验服务
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端粒酶活性检测实验
探针合成实验服务
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