鱼类主要组织相容性复合体elisa检测试剂盒操作流程
鱼类主要组织相容性复合体elisa检测试剂盒操作流程如下:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入pbs 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的hrp-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加tmb显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/l h2so4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2,最终测得的od值为两者之差(w1-w2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。产品仅用于科研
(13)数据处理:在得出标本(s)和阴性对照(n)的 od值后,计算s/n值。s/n≥2.1为阳性判定标准。
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(4)阴性对照孔每孔加入pbs 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。
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(10)每孔加tmb显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/l h2so4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2,最终测得的od值为两者之差(w1-w2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。产品仅用于科研
(13)数据处理:在得出标本(s)和阴性对照(n)的 od值后,计算s/n值。s/n≥2.1为阳性判定标准。
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