CCK8细胞实验
实验一：细胞增殖分析
1）制备细胞悬液，计数。2）在96孔板中接种细胞悬液，每孔约100μl，同样的样本可做3个重复。3）将培养板放入培养箱中预培养一段时间（37℃, 5%co2），细胞贴壁需要大约2-4h，如果是悬浮细胞，该步骤可以省去。4）每孔各加入10μl cck-8溶液，由于加入的cck-8量比较少，可能会因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻晃动培养板以帮助混匀，或者直接配置含10%cck-8的培养基，以换液的形式加入。另外注意，加样的过程中尽量不要产生气泡。5）将培养板放入培养箱中孵育1-4h。因为细胞种类不同，形成的formazan的量也不一样，所以如果显色不够的话，可以延长培养时间，特别是血液细胞形成的formazan很少，需要较长的显色时间（5-6h）。6）酶标仪测定450nm处的吸光值（od）。7）若暂时不测定od值，可以在各孔中加入10μl 0.1 m的hcl溶液或者1% w/v sds溶液，室温下避光保存，这样可以保证od值在24h内不发生变化。
实验二：细胞毒性分析
1）制备细胞悬液，计数。2）在96孔板中接种细胞悬液，每孔约100μl，同样的样本可做3个重复。3）将培养板放入培养箱中预培养一段时间（37℃, 5%co2），细胞贴壁需要大约2-4h，如果是悬浮细胞，该步骤可以省去。4）向培养板各孔中加入不同浓度的毒性物质（药物、化学试剂等待检测物质）。5）将培养板放入培养箱中孵育一段时间，例如6、12、24、48h，具体时间要看待测物质的性质和细胞的敏感性。如果待检测物质有氧化性或还原性，可在加入cck-8之前更换新鲜培养基，以去掉待测物质的影响。如果影响比较小或者没有影响，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。6）向每孔中加入10μl cck-8溶液，由于加入的cck-8量比较少，可能会因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻晃动培养板以帮助混匀，或者直接配置含10%cck-8的培养基，以换液的形式加入。另外注意，加样的过程中尽量不要产生气泡，以免影响od值读数。7）将培养板放入培养箱中孵育1-4h。因为细胞种类不同，形成的formazan的量也不一样，所以如果显色不够的话，可以延长培养时间，特别是血液细胞形成的formazan很少，需要较长的显色时间（5-6h）。8）用酶标仪测定450nm处的吸光度（od）。9）若暂时不测定od值，可以在各孔中加入10μl 0.1 m的hcl溶液或者1% w/v sds溶液，室温避光保存，这样可以保证od值24h内不发生变化。
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实验二：细胞毒性分析
1）制备细胞悬液，计数。2）在96孔板中接种细胞悬液，每孔约100μl，同样的样本可做3个重复。3）将培养板放入培养箱中预培养一段时间（37℃, 5%co2），细胞贴壁需要大约2-4h，如果是悬浮细胞，该步骤可以省去。4）向培养板各孔中加入不同浓度的毒性物质（药物、化学试剂等待检测物质）。5）将培养板放入培养箱中孵育一段时间，例如6、12、24、48h，具体时间要看待测物质的性质和细胞的敏感性。如果待检测物质有氧化性或还原性，可在加入cck-8之前更换新鲜培养基，以去掉待测物质的影响。如果影响比较小或者没有影响，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。6）向每孔中加入10μl cck-8溶液，由于加入的cck-8量比较少，可能会因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻晃动培养板以帮助混匀，或者直接配置含10%cck-8的培养基，以换液的形式加入。另外注意，加样的过程中尽量不要产生气泡，以免影响od值读数。7）将培养板放入培养箱中孵育1-4h。因为细胞种类不同，形成的formazan的量也不一样，所以如果显色不够的话，可以延长培养时间，特别是血液细胞形成的formazan很少，需要较长的显色时间（5-6h）。8）用酶标仪测定450nm处的吸光度（od）。9）若暂时不测定od值，可以在各孔中加入10μl 0.1 m的hcl溶液或者1% w/v sds溶液，室温避光保存，这样可以保证od值24h内不发生变化。
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