细胞类代谢组学样本收集步骤
适用细胞类型：哺乳动物细胞（cho、ns0、cd-hybridoma 细胞系）
样品量要求：
1*10 7 cell/sample，提供 2 份样本。
样本收集步骤：
1） 使用细胞计数器测定细胞数量，计算出所需淬灭缓冲液的量。下图以细胞数量1*10 7 为例；
note：①使用50ml圆锥形管一次处理样本zui大量为8ml，如果样本量>8ml，就分开做；②淬灭过程时间敏感，两个人操作。
2） 将 5 倍样本体积的淬灭缓冲液加入 50ml 圆锥形管中；
3） 在低温恒温器上预冷淬灭缓冲液至-40℃ （淬灭缓冲液：60%（v/v）甲醇+0.85%（wt/v）碳酸氢铵（ph7.4，使用 12m 的盐酸进行 ph 调节）。如果没有低温恒温器，可以使用干冰代替，并用低温温度计检测温度，保证每管都处于-40℃，温度不能过低）；
note： 由于单人操作，zui多 2 样本/次，双人操作，4 样/次。保证淬灭处理迅速。因为时间要求“迅速”。
4） 吸取 1 体积的细胞样本（1*10 7 ），加入到盛有淬灭缓冲液的管*。 note： 温度必须维持在-40℃左右，低于 45℃时，会导致细胞破碎。
5） 缓慢摇晃管子，混匀。
note： 禁止 vortex 涡旋震荡混匀！
6） 1000g 离心 1min；
7） 去除上清。note：当上清被去除干净后，继续贴壁吸取 5s 以保证上清*被去除，因为有些上清粘在壁上，回落的话，会对后继操作带来负面影响。
8） 使用 200μl -80℃的甲醇将细胞重悬，并转移到 1.5ml 的离心管中，然后用液氮冰冻；
9） -80 度冻存。足量干冰寄送。
注意事项：
1）淬灭缓冲液 ph 值要在每次适用前重新测定调整。
2）温度要控制好，强烈建议使用-40℃冰柜操作。
参考文献：
sellick c a, hansen r, stephens g m, et al. metabolite extraction from suspension-cultured mammalian cells for global metabolite profiling.[j]. nature protocol, 2011, 6(8):1241-9.
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note：①使用50ml圆锥形管一次处理样本zui大量为8ml，如果样本量>8ml，就分开做；②淬灭过程时间敏感，两个人操作。
2） 将 5 倍样本体积的淬灭缓冲液加入 50ml 圆锥形管中；
3） 在低温恒温器上预冷淬灭缓冲液至-40℃ （淬灭缓冲液：60%（v/v）甲醇+0.85%（wt/v）碳酸氢铵（ph7.4，使用 12m 的盐酸进行 ph 调节）。如果没有低温恒温器，可以使用干冰代替，并用低温温度计检测温度，保证每管都处于-40℃，温度不能过低）；
note： 由于单人操作，zui多 2 样本/次，双人操作，4 样/次。保证淬灭处理迅速。因为时间要求“迅速”。
4） 吸取 1 体积的细胞样本（1*10 7 ），加入到盛有淬灭缓冲液的管*。 note： 温度必须维持在-40℃左右，低于 45℃时，会导致细胞破碎。
5） 缓慢摇晃管子，混匀。
note： 禁止 vortex 涡旋震荡混匀！
6） 1000g 离心 1min；
7） 去除上清。note：当上清被去除干净后，继续贴壁吸取 5s 以保证上清*被去除，因为有些上清粘在壁上，回落的话，会对后继操作带来负面影响。
8） 使用 200μl -80℃的甲醇将细胞重悬，并转移到 1.5ml 的离心管中，然后用液氮冰冻；
9） -80 度冻存。足量干冰寄送。
注意事项：
1）淬灭缓冲液 ph 值要在每次适用前重新测定调整。
2）温度要控制好，强烈建议使用-40℃冰柜操作。
参考文献：
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