丘脑分泌素受体抗体(食欲素受体)的生wu素化标记实验要点

丘脑分泌素受体抗体(食欲素受体)的生wu素化标记实验要点:
1.如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在,会抑制标记反应。因此,蛋白质在反应前要对 0.1mol/l碳suan氢钠缓冲液或0.5mol/l硼酸缓冲液充分透析;
2.所用的nhsb及待生wu素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同,选择不当则影响标记的效率,应先用几个不同的分子比来筛选最适条件;
3.用nhsb量过量也是不利的,抗原的结合位点可能因此被封闭,导致抗体失活;
4.由于抗体的氨基不易接近可能造成生wu素化不足,此时可加入去污剂如 triton x-100, tween20等;
5.当游离ε-氨基(赖氨酸残基的氨基)存在于抗体的抗原结合位点时,或位于酶的催化位点时,生wu素化会降低或损伤抗体蛋白的结合力或活性;
6.生wu素还可能与不同的功能基团,如羰基、氨基、巯基、异咪唑基及ben酚基,也可与糖基共价结合;
7.交联反应后,应充分透析,否则,残余的生wu素会对生wu素化抗体与亲和素的结合产生竞争作用;
8.在细胞的荧光标记实验中,中和亲和素的本底低,但由于链霉亲和素含有少量正电荷,故对某些细胞可导致高本底。
9.产品仅用于科研,详见说明。
小鼠基质细胞衍生因子-1a(mouse sdf-1a)
小鼠基质细胞衍生因子-1r(mouse sdf-1r)
小鼠可溶性e-选择素(mouse se-selectin/scd62e)
小鼠可溶性l-选择素(mouse sl-selectin/scd62l)
小鼠可溶性p-选择素(mouse sp-selectin/scd62p)
小鼠p物质(mouse substance p)
小鼠催乳素(mouse prl)
小鼠孕酮(mouse prog)
小鼠睾酮(mouse testo)
小鼠胸腺活化调节趋化因子(mouse tarc)
小鼠组织因子(mouse tf)
小鼠组织因子抑制物(mouse tfpi)
小鼠转化生长因子-β1(mouse tgf-β1)
小鼠转化生长因子-β2(mouse tgf-β2)
小鼠可溶性粒细胞靶受体(mouse strem-1)
小鼠端粒酶(mouse telomerase)
小鼠toll样受体-2(mouse tlr-2)
小鼠toll样受体-4(mouse tlr-4)
小鼠基质金属蛋白酶抑制剂-1(mouse timp-1)
小鼠基质金属蛋白酶抑制剂-2(mouse timp-2)
小鼠肿瘤坏死因子-a(mouse tnf-a)
小鼠肿瘤坏死因子-b(mouse tnf-b)
小鼠肿瘤坏死因子-r(mouse tnf-r)

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